Adição da proteína específica do oviduto de porcas (pOSP) e da melatonina em meios de maturação e o efeito na clivagem in vitro de embriões suínos / Addition of the oviduct specific protein of porcine (pOSP) and melatonin in maturation media and their effect on the in vitro production of pig embryos

No presente estudo, utilizou-se a melatonina e a proteína específica do oviduto (pOSP) nos meios de maturação in vitro. Foram avaliadas a expansão do complexo cumulus-ovócito (CCOs), as concentrações intracelulares de espécies reativas de oxigênio (ROS) e o desenvolvimento embrionário nos diferentes grupos (C = controle; T1 = somente com melatonina; T2 = com melatonina e pOSP e T3 somente com pOSP). No tocante à expansão do CCOs, houve diferença (P<0,05) dos valores obtidos no grupo C em relação aos valores médios dos grupos T1, T2 e T3, porém não houve diferença entre os valores obtidos nos tratamentos (P>0,05). Na dosagem de ROS, não houve diferença entre os valores médios obtidos no grupo C (26,4±10,9) e o valor verificado no grupo T1 (23,4±7,8), porém no grupo T2 (21,3±9,7) o valor médio mostrou-se satisfatório em relação ao valor do grupo C. No entanto, o valor médio do grupo T3 (16,6±10,5) foi o que demonstrou resultado mais satisfatório quando comparado aos demais grupos (P<0,05). A produção de embriões foi avaliada por meio da taxa de clivagem. Não houve diferença (P >0,05) entre os valores obtidos entre o grupo C (48,9 %) e os valores verificados nos grupos T1 (51,5 %), T2 (50 %), T3 (57,7 %), nem destes entre si. Este estudo permitiu concluir que a proteína específica do oviduto recombinante e a melatonina foram eficientes em melhorar a expansão dos CCOs. Além disso, as células tratadas com pOSP mostraram-se com menor quantidade de ROS, podendo a pOSP ser considerada um antioxidante proteico.(AU)

The present study used melatonin and recombinant oviduct specific protein (pOSP) in in vitro maturation medium (IVM). The expansion of the cumulus-oocyte complexes (COCs), the intracellular concentrations of reactive oxygen species (ROS) and embryo development of the different groups were evaluated (C = control; T1 = melatonin; T2 = melatonin and pOSP and T3 = pOSP). Regarding the COCs expansion, the groups T1, T2 and T3 showed satisfactory results compared with group C (P<0.05), but there was no difference between treatments (P>0.05). In the ROS dosage, there was no difference between the mean values obtained in group C (26.4 ± 10.9) and group 1 (23.4 ± 7.8). However, in group 2 (21.3 ± 9.7), the average value was found to be satisfactory in relation group C. Despite that, the average value of treatment 3 (16.6 ± 10.5) was the most satisfactory result found compared to the other groups (P<0.05). The production of embryos was evaluated by cleavage rate, there was no difference between the values obtained in group C and the values recorded in groups T1 (51.5 %), T2 (50 %), T3 (57.7 %), and among them. This study showed that the pOSP and the melatonin were effective in the improvement of the expansion of COCs cells. In addition, the cells that were treated with pOSP presented a lower amount of ROS, allowing the pOSP to be considered a proteic antioxidant.(AU)

Influência da condição corporal ao parto no balanço energético e desempenho reprodutivo de cabras leiteiras no pós-parto / Influence of body condition at calving on energy balance and reproductive performance of dairy goats in the postpartum

O estudo teve como objetivo avaliar a influência da condição corporal (CC) ao parto no balanço energético (BE) e o desempenho reprodutivo de cabras Alpinas no pós-parto. Foram utilizadas 68 cabras distribuídas em três grupos (G), sendo: G1- cabras com baixa CC (CC entre 1,5 e 2,5); G2: cabras com moderada CC (entre 2,75 e 3,5) e G3: cabras com alta CC (entre 3,75 e 5,0). Os animais receberam dieta (silagem de milho e concentrado, com 18% de proteína bruta e 1,7Mcal/kg de matéria seca de energia líquida) ad libitum. As avaliações foram feitas nas oito primeiras semanas de lactação, para determinação do BE, do intervalo do parto à primeira ovulação e ao primeiro estro e da concentração plasmática de progesterona. Os dados foram analisados por análise de variância a 5% de probabilidade. Não houve efeito da CC ao parto sobre o BE dos animais. Todas as cabras apresentaram BE negativo ao parto, com mudança para BE positivo aos 51, 58 e 64 dias pós-parto, respectivamente. Não houve diferença na concentração plasmática de progesterona nos três grupos, sendo caracterizada função luteal (concentração ≥1ng/dL) em apenas 5,9% dos animais avaliados. O intervalo do parto à primeira ovulação foi de 46 dias. Apenas 4,4% das cabras exibiram estro. Cabras leiteiras de média produção, entre 2,5 e 3,0kg de leite/dia, entram em BE negativo ao parto, independentemente da CC apresentada, influenciando negativamente o reinício da atividade ovariana no pós-parto.(AU)

The concentration of progesterone in the blood was used to study the effect of body condition score (BCS) on the post-partum ovarian activity of dairy goats. Sixty-eight female goats were distributed between three treatments. Treatment 1: goats with BCS between 1.00 and 2.75; Treatment 2: goats with BCS between 2.75 and 3.50; and Treatment 3: goats with BCS between 3.50 and 5.00. The goats had the blood collected immediately after birth, and from that time up to the eighth week post-partum at three day intervals. The progesterone analysis on the blood was used to determine the interval between the birth and the first ovulation. The females were teasing two times per day for estrus detection and determination of the time interval from birth to first estrus. No significant difference was found on the progesterone concentration between treatments. The luteal functionality was characterized in only 5.9% of goats, with a concentration higher than 1ng/mL. The period from birth to first ovulation was 46 days. The detectable estrus was found in only 4.4% of goats. The BCS at birth did not influence the recovery of ovarian activity of dairy goats.(AU)

Expressão gênica em ovócitos suínos de diferentes classificações morfológicas / Gene expression in swine oocytes in different morphological classifications

A produção in vitro de embriões suínos tem alcançado resultados insatisfatórios: ovócitos maturados in vivo produzem uma porcentagem maior de embriões em relação aos maturados in vitro. O sucesso da maturação in vitro está diretamente relacionado com a competência ovocitária. Somente ovócitos competentes são capazes de serem fecundados e terem desenvolvimento embrionário normal. A competência ovocitária pode ser avaliada por vários parâmetros. Recentemente têm sido utilizados como parâmetro os estudos da expressão de genes associados com a competência. O presente trabalho teve por objetivo avaliar diferenças na expressão dos genes BMP15, RYBP, MATER e ZAR1 em ovócitos imaturos de diferentes classes morfológicas, sendo elas: 1, 2, 3 e 4, com a finalidade de proporcionar importantes marcadores moleculares relacionados com a capacidade ovocitária. O RNA total dos ovócitos foi extraído e utilizado como molde para a síntese da primeira fita de cDNA. Os resultados da expressão gênica foram analisados utilizando-se modelo misto, considerando os dados de expressão gênica variável dependente e as classes ovocitárias variáveis independentes. Os genes BMP15, ZAR1 e RYBP apresentaram expressão semelhante nas classes ovocitárias 1, 2 e 3; somente a categoria 4 diferiu na expressão desses genes (P<0,05). O gene MATER foi expresso de forma semelhante em todas as classes ovocitárias estudadas (P>0,05). A técnica de RT-qPCR foi eficiente para detecção desses transcritos em ovócitos de diferentes classes. No entanto, para melhor entendimento do envolvimento desses transcritos na aquisição da competência ovocitária, são necessários mais estudos avaliando ovócitos de diferentes classes morfológicas, em diferentes fases de desenvolvimento, e implicação de outros genes envolvidos com a competência ovocitária.

The in vitro production of pig embryos has achieved unsatisfactory results; in vivo matured oocytes produce a higher percentage of embryos compared to in vitro maturation. The success of in vitro maturation is directly related to oocyte competence. Only competent oocytes are capable of being fertilized and have normal embryonic development. The oocyte competence can be assessed using several parameters. Recently these parameters have been used for gene expression studies associated with competence. This work aimed to evaluate differences in gene expression BMP15, RYBP, MATER, ZAR1 as endogenous control and the constitutive gene GAPDH in immature oocytes of different morphological classes which are: 1, 2, 3 and 4, in order to provide significant molecular markers linked to the ability of development. Oocytes Total RNA was extracted and used as a template for synthesis of the first cDNA strand. The results of gene expression were analyzed using a mixed model, considering the dependent gene expression data and independent ovocitary variable classes. The genes BMP15, RYBP ZAR1 and showed similar ovocitary expression in classes 1, 2 and 3 differ only in category 4 in their expression (P<0.05). The MATER gene was similarly expressed in all ovocitary classes studied (P>0.05). The RTQ-PCR technique was effective for detection of these transcripts in oocytes from different classes. However, for better understanding of the involvement of these transcripts in the acquisition of oocyte competence more studies are needed to evaluate different morphological classes of oocytes at different stages of development and the implication of other genes involved in oocyte competence.

Influência do Hormônio do Crescimento na concentração de testosterona plasmática e nas características seminais de touros jovens e adultos da raça Nelore / Influence of Growth Hormone on plasma testosterone concentration and seminal characteristics of young and adult Nellore bulls

Estudou-se o efeito do Hormônio do Crescimento bovino (bGH) sobre os parâmetros seminais e a concentração sérica de testosterona de touros da raça Nelore. Dezesseis touros foram distribuídos em um delineamento fatorial 2 x 2 (duas idades e dois níveis de r-bST), com quatro animais em cada tratamento. As aplicações de r-bST foram realizadas a cada 14 dias, totalizando nove aplicações por animal, em um período experimental de 120 dias. As coletas de sêmen foram realizadas a cada 15 dias e, para determinar as concentrações de testosterona, foram realizadas coletas de sangue a cada quatro horas, num total de 24 horas, e a cada 30 dias a partir da primeira aplicação de r-bST. O sêmen dos touros adultos tratados com r-bST apresentaram maior motilidade e vigor (P<0,05) em relação aos animais controles (79,70±11,56% vs 64,06±23,65%) e (3,80±0,88 vs 2,92±1,25), respectivamente; entretanto, as demais características seminais não foram influenciadas (P>0,05) pelo tratamento com r-bST. Os aspectos físicos do sêmen dos touros jovens não foram afetados (P>0,05) pelo tratamento com r-bST. Entretanto o tratamento com r-bST diminuiu os defeitos morfológicos menores (delgado, gigante normal, pequeno normal, globoso, cabeça isolada normal, abaxial, cauda dobrada e enrolada levemente e gota distal) em relação aos jovens não tratados (P<0,05). As concentrações séricas de testosterona foram influenciadas (P<0,05) pelo tratamento, aos 120 dias após a primeira aplicação do r-bST, e apresentaram tendência de três picos no período de 24 horas.

The aim of this trial was to study the effect of Growth Hormone (GH) on the seminal parameters and testosterone profile from Nellore bulls. Sixteen bulls were allocated in a 2 x 2 factorial arrangement (two ages and two r-bST levels), with four animals per treatment. The r-bST was injected every 14 days, with a total of nine injections per animal, during the 120 days of the experimental period. The semen collections were done every 15 days and blood samples were collected in four hour intervals for 24 hours, and in 30 day intervals from the first r-bST injection for testosterone profile. The semen of adult bulls treated with r-bST showed greater MOT and VIG (P<0.05) in relation to the control (79.70±11.56% vs 64.06±23.65%) and (3.80±0.88 vs 2.92±1.25) respectively; however, the other evaluated seminal parameters were not affected (P>0.05) by the r-bST treatment. The physical measurements of the semen of young animals was also unaffected (P>0.05) by r-bST injection. However, the treatment with r-bST decreased the number of minor morphologic defects (narrow head, giant head, small normal head, round head, free normal head, abaxial implantation, simple bent tail and distal droplet) compared to untreated young bulls (P<0.05). The serum testosterone concentration was influenced (P<0.05) by treatment, at 120 days after the first injection of r-bST and they showed a tendency of three picks in a 24 hour period of sampling.

Follicular dynamics and gene expression in granulosa cells, corpora lutea and oocytes from gilts of breeds with low and high ovulation rates.

Follicular dynamics and the expression of candidate genes using real-time polymerase chain reaction (PCR) were compared during the oestrous cycle of pig breeds with high (commercial line; n=24) and low (local Brazilian Piau; n=21) ovulation rates and prolificacy. Gilts were killed on Days 0, 4, 10 and 18 of the oestrous cycle and visible ovarian follicles were classified by follicular diameter. Recovered cumulus-oocyte complexes were classified as normal or atretic and frozen in liquid nitrogen until RNA extraction. Low ovulation rates and/or prolificacy in Piau gilts was associated with a different pattern of follicle development, with lower numbers of small follicles on Day 18, fewer large follicles on Days 0 and 18 (P≤0.05) and a higher proportion of atretic follicles on Days 0 and 18 (P≤0.05). Compared with commercial line gilts, less-prolific Piau gilts exhibited higher expression of apoptotic genes during luteolysis (CASP3 and FASL; P≤0.05), decreased expression of TGFBR2 and BAX mRNA in the corpus luteum (P≤0.05), higher expression of apoptotic genes (FAS, BCL2 and CASP8; P≤0.05) in granulosa cells and a greater abundance (P≤0.05) of genes controlling oocyte-secreted factors (GDF9, BMP15 and BMP6), suggesting underlying mechanisms controlling differences in follicular development, ovulation rate and inherent prolificacy in this pig breed.

The hypoosmotic swelling test in fresh rabbit spermatozoa.

The hypoosmotic swelling test (HOST) has proved to be a good tool for evaluating the membrane integrity of spermatozoa of various domestic animals including cattle, horses, and swine. However, the best approach for using this technique in rabbit semen has not been tested. The present study aimed to establish the best hypoosmotic solution (HS) for testing membrane integrity in fresh rabbit semen. Sucrose solutions with the following osmolarities were used: 50, 60, 75, 100, 125 and 150mOsm/L. Semen samples (n=30) were collected from five mature White New Zealand rabbits (six collections per rabbit) at 72h intervals. After macroscopic evaluation, 10microL of semen was immediately added to 2mL of each solution and incubated for 1h at 37 degrees C. Sequentially, 20microL of semen diluted in HS were evaluated with oil immersion using a phase-contrast microscope. A total of 200 spermatozoa were counted in at least five different fields, and sperm tails were classified as non-coiled, coiled, and strongly coiled. The respective percentages of spermatozoa with coiled tails (coiled plus strongly coiled) in the six solutions listed above were 54.8, 65.2, 54.3, 53.9, 38.9 and 29.4%. Percentage of strongly coiled spermatozoa was: 40.2, 51.0, 43.2, 41.5, 32.7 and 26.9 for the six solutions, respectively. According to total and strong coiling 60mOsm/L was superior to others treatments (P<0.05). Results suggest that the 60mOsm/L solution would be most desirable for use in HOST in fresh rabbit spermatozoa.

Sincronização de estro com CIDR reutilizado em cabras lactantes da raça Toggenburg tratadas com somatotropina bovina recombinante (r-bST) / Estrous synchronization with recycled CIDR in lactating Toggenburg does treated with recombinant bovine somatotropin (r-bST)

Avaliou-se a resposta de cabras tratadas com r-bST no protocolo de sincronização de estro. Foram utilizadas 26 cabras Toggenburg, divididas em dois tratamentos: T1 (n=13), tratadas com quatro injeções de 250mg de r-bST, a intervalos de 14 dias, e T2 (n=13), tratadas com solução salina (controle). Na semana seguinte à última injeção da r-bST, colocou-se o dispositivo intravaginal com progesterona (dia 0), previamente utilizado por cinco dias, e injetou-se PGF2alfa (22,5µg) nos animais dos dois tratamentos, e o dispositivo foi retirado no dia 6. Todas as fêmeas em estro foram submetidas à monta natural. A porcentagem de animais em estro e a taxa de gestação foram 76,9 e 70,0 e 84,6 e 72,7 por cento, no T1 e T2, respectivamente. Não houve diferença (P>0,05) na duração do estro, no intervalo tratamento-início do estro, no número de ovulações, nos intervalos: início e final do estro à ovulação e retirada do dispositivo à ovulação entre os animais dos dois tratamentos. O diâmetro médio dos folículos ovulatórios das fêmeas não diferiu (P>0,05). Durante a permanência do dispositivo, as concentrações séricas de progesterona apresentaram valores semelhantes (P>0,05) entre as cabras de T1 e T2. A r-bST não afetou a sincronização de estro.

The response of goats treated with r-bST in the estrous synchronization protocol was evaluated. Twenty-six Toggenburg females were divided in two treatments: T1 (n=13) treated with four injections of 250mg r-bST, at 14 days intervals, and T2 (n=13) treated with saline solution (control). The intravaginal device previously used by five days was inserted (day 0) one week after the last injection of r-bST and PGF2alpha (22.5µg) was injected in the animals of both treatments. The device was removed on day 6. All the females in estrus were bred by fertile bucks. The percentage of animals in estrus and the pregnancy rate were: 76.9 and 70, and 84.6 and 72.7 percent for goats in T1 and T2, respectively. The estrous cycle length; the interval from treatment to the onset of estrus; the ovulation number; and the intervals from the onset of estrus to ovulation, end of estrus to ovulation, and from device removal to ovulation were not affected by r-bST injection. The r-bST did not affect the diameter of the ovulatory follicles (P>0.05). Progesterone concentration showed similar values (P>0.05) among the goats of T1 and T2 during the treatment with device. The r-bST administration did not affect estrous synchronization.

Progesterone and behavioral features when estrous is induced in Alpine goats.

The objective of the present study was to evaluate the endocrine and behavioral features of estrous-induced Alpine goats. A total of 36 nulliparous, 40 non-lactating and 42 lactating does were treated with intravaginal 60 mg medroxyprogesterone acetate sponges for 9 d plus 200 IU eCG and 22.5 microg d-cloprostenol 24 h before sponge removal. Plasma progesterone concentration was analyzed from blood sampled on days 0 (sponge insertion), 5, 8 (cloprostenol administration) and 9 (sponge removal) in 11 nulliparous, 13 non-lactating and 11 lactating does. Estrous response did not differ (P>0.05) among nulliparous (97.2%), non-lactating (90.00%) and lactating does (85.7%). Interval to estrus and duration of estrus did not differ (P>0.05) among nulliparous (22.8+/-9.9 and 25.6+/-6.8h), non-lactating (23.7+/-15.8 and 25.0+/-6.0 h) and lactating does (22.2+/-10.4 and 24.9+/-4.2h). The accumulative percentage of does in estrus during the first 36 h after sponge removal was 88.1%. The correlation between interval to estrus and duration of estrus was r=-0.32 (P<0.001). Endogenous progesterone production is decreased until day 8 or suppressed by MAP on day 9. Conception rate was greater (P<0.01) in lactating (77.8%) than non-lactating (44.4%) but similar (P>0.05) to nulliparous (60.0%) goats. Estrus can be efficiently induced by means of hormonal treatment in goats and acceptable fertility can be obtained regardless of animal category.

Dinâmica folicular em cabras da raça Toggenburg em lactação tratadas ou não com somatotropina bovina recombinante / Follicular dynamics of lactating Toggenburg does treated with recombinant bovine somatotropin

Avaliou-se o efeito da injeção de somatotropina bovina recombinante (r-bST) sobre o ciclo estral de cabras. Foram utilizadas 24 fêmeas da raça Toggenburg, distribuídas em dois tratamentos: T1 (n=12), cabras tratadas com r-bST; e T2 (n=12), cabras tratadas com solução salina (controle). A partir da primeira injeção do tratamento, acompanhou-se o ciclo dos animais em estro até o estro subseqüente. O comprimento médio do ciclo estral e o período interovulatório não diferiram (P>0,05) entre os tratamentos. Foram verificados ciclos estrais de duas, três e quatro ondas de crescimento folicular. Não houve diferença (P>0,05) entre os tratamentos quanto ao número de ondas do ciclo estral. O número de folículos detectados com diâmetro >3mm nas cabras do T1 foi maior (P<0,05) que naquelas do T2 nos ciclos com duas (15,3±1,2 x 8,1±2,0), três (12,2±0,8 x 8,3±1,9) e quatro (12,7±1,7 x 8,8±2,5) ondas. O folículo dominante da segunda onda foi menor (P<0,05) que o da primeira e terceira ondas e também menor que o da onda ovulatória tanto para T1 quanto para T2. A concentração sérica de progesterona durante o ciclo estral não foi influenciada pelos tratamentos com r-bST (P>0,05). A r-bST não alterou a dinâmica folicular de cabras lactantes da raça Toggenburg, mas promoveu o aumento do número de folículos recrutados ³3mm durante o ciclo estral

The effect of the r-bST injection was evaluated on the goats estrous cycles. Twenty-four Toggenburg does were used in two treatments: T1 (n=12) treated with r-bST; and T2 (n=12) treated with saline solution (control). After the first r-bST injection, the estrous cycles were checked between two estrus. The estrous cycle length and interovulatory period of the goats did not differ between treatments (P>0.05). Estrous cycles with two, three and four waves of follicular growth were observed. The number of waves during the estrous cycle were not affected by the r-bST treatment (P>0.05). The number of 3mm follicles was different between T1 and T2 (P<0.05) for estrous cycles with two (15.3±1.2 x 8.1±2.0), three (12.2±0.8 x 8.3±1.9) or four (12.7±1.7 x 8.8±2.5) waves. The dominant follicle of the second wave was smaller (P<0.05) than the one of the first and third waves and smaller than the one of the ovulatory wave. The progesterone concentration during the estrous cycle of the animals did not differ (P>0.05) between treatments. The r-bST did not affect the ovarian response during the estrous cycle. The r-bST not affected the follicular dynamic of Toggenburg lactating does, but increased the number of emerging follicles >3mm during the estrous cycle

Perfil metabólico de touros da raça Nelore (Bos taurus indicus) confinados e tratados com somatotrofina bovina recombinante (r-bST) / Metabolic and hormonal profile of feedlot Nellore bulls (Bos taurus indicus) and treated with recombinant bovine somatotropin (r-bST)

Avaliaram-se os efeitos da administração da somatotrofina bovina recombinante (r-bST) sobre os metabólitos sangüíneos de touros da raça Nelore de duas diferentes idades. Foram utilizados 16 touros, distribuídos em um delineamento fatorial 2 x 2 (idades: jovens e adultos; r-bST: 0 e 500mg) com quatro animais por tratamento. A idade média dos animais foi de 13,37 e 20,62 meses para jovens e adultos, respectivamente. Quatro animais por tratamento receberam, a cada 14 dias, solução salina ou 500mg de r-bST, totalizando nove aplicações por animal, em um período experimental de 120 dias. Os touros foram alimentados com silagem de milho e ração concentrada à base de farelo de milho e soja, duas vezes por dia, fornecidas em baias individuais. As coletas de sangue foram realizadas a cada três dias, para determinação da concentração dos metabólicos sangüíneos. Para análise estatística, foram compilados dados a intervalo de três aplicações, o que constituiu um período (período 1, 2 e 3). As concentrações de ácidos graxos não-esterificados (NEFA) foram analisadas semanalmente. As concentrações séricas de colesterol, proteína total e plasmáticas de glicose diferiram para os períodos e nos grupos de tratamentos (P<0,05). As concentrações de NEFA foram influenciadas pelas semanas de coleta (P<0,05), mas não pelo tratamento com ou sem r-bST (P>0,05).

This study was carried out to evaluate the effect of recombinant bovine somatotropin (r-bST) administration on profiles of blood metabolites of two different ages Nellore bulls. Sixteen bulls were randomly allotted in a factorial arrangement 2 x 2 (ages: youngs and adults; and r-bST dose: 0 and 500 mg) with four animals per treatment. The mean ages of the young and adult animals were 13.37 and 20.62 months, respectively. Four animals per treatment received saline solution or r-bST 500mg, every 14 days, totaling nine applications per animal during 120 days. The Bulls were fed corn silage and concentrated diet based on corn crumb and soybean meal, twice a day, in individual stalls. Blood was collected every three days for metabolic evaluation. The statistical analyses of the data were performed in three applications, considering three periods (1, 2 and 3). Non-esterified fatty acid (NEFA) concentrations were weekly analyzed. Serum cholesterol, total protein and glucose levels were affected either by period or the treatment (P<0.05). The NEFA was affected by weeks of collection (P<0.05) but not by r-bST treatment (P>0.05).